Гаптоглобин (Haptoglobin, Hp, HPT)

Количественное определение гаптоглобина в сыворотке и плазме иммунотурбидиметрическим методом КОЛИЧЕСТВО в наборе:      N по каталогу 11050 D   110 мл КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Определение уровня гаптоглобина используется для диагностики внутри- и внесосудистого гемолиза, ост­рых воспалительных заболеваний, а также с целью дифференциального фенотипирования.

МЕТОД

Определение гаптоглобина основано на специфическом взаимодействии между антителами к гаптоглобину поликлональной антисыворотки и соответствующим антигеном при оптимальном рН в присутствии ПЭГ. Мутность раствора, возникающая в результате образования комплекса, прямо пропорциональна концен­трации гаптоглобина в пробе.

СОСТАВ НАБОРА

1. Реагент А      2 х 50мл

Фосфатный буфер, рН = 7,5   20 ммоль/л
ПЭГ                                                         >5%

Хлорид натрия                                    150 ммол/л

Азид натрия                                         <0,1%

2. Реагент В      2 х 1мл

Поликлональные антитела к гаптоглобину
Азид натрия                                         <0,1%

3. Реагент С      1 х 10 мл

Буфер Гуддса, рН = 7,5                     50 ммоль/л

Хлорид натрия                                    150 ммол/л

Азид натрия                                         <0,1%

4. Пустой флакон на 20 мл для приготовления рабочего раствора ВС может быть использован для
установки на некоторых типах автоанализаторов.

ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ

Реагент А готов к применению. В нераспечатанном флаконе реагент стабилен вплоть до указанной даты при хранении 2...8°С. После вскрытия реагент сохраняет стабильность в течение 120 дней при 2...8°С. Раствор ВС: Смешайте 1 часть реагента В и 3 части реагента С. Тщательно перемешайте не допуская вспенивания. Раствор стабилен в течение 60 дней при хранении 2...8°С

Стабильность реагентов и растворов обеспечивается при отсутствии загрязнения. Флаконы закрывайте крышками сразу после использования.

КАЛИБРОВКА

Для калибровки рекомендуется использовать калибратор плазменных белков Plasmaproteins Cal Кат.№ 11200 D (3х1 мл) жидкая форма. Для построения калибровочной зависимости следует приготовить 5 после­довательных разведений калибратора, как указано в таблице.

[С] - концентрация гаптоглобина в калибраторе Plasmaproteins Cal.

В отличие от проб и контрольных материалов, калибратор не требуется предварительно разводить в отно­шении 1:21.

ПРОБЫ

Сыворотка, плазма (гепарин, ЭДТА).

Стабильность: 2 дня при температуре хранения 2...8°С.

Перед проведением анализа пробы пациентов и контрольные материалы разводятся физиологическим раствором в отношении 1:21 (1v + 20v).

УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЯ

Длина волны: 340 (334-365) нм

Оптический путь: 1 см

Температура: 37°С

Измерение: по конечной точке (увеличение оптической плотности)

СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до 37°С. Температура должна быть стабильной (+/- 0,5°С) в течение всего определения.

Осторожно перемешать, инкубировать 10 минут при 37°С. Измерить оптическую плотность разведений ка­либратора, проб и контрольных материалов против холостой пробы.

Пропорциональное изменение объемов реагентов и пробы не влияет на конечный результат.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

Построить калибровочную зависимость, откладывая по оси Х значения концентраций для каждого разведе­ния калибратора, а по оси Y - значения оптической плотности соответствующего разведения. Концентрация в пробах определяется при помощи калибровочного графика по значению оптической плот­ности пробы.

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ

Диапазон измерений 35 - 700 мг/дл. Если концентрация гаптоглобина в пробе превышает 700 мг/дл, раз­бавьте исходную пробу физиологическим раствором и повторите исследование. Полученный результат ум­ножьте на коэффициент разведения. Нижний предел определения 8 мг/дл. Эффект прозоны не наблюдается до концентрации 3500 мг/дл.

РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ

Сыворотка / плазма: 30 - 200 мг/дл

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для проведения контроля качества рекомендуется использовать контрольные сыворотки с аттестованными для этого метода значениями гаптоглобина.

ПРИМЕЧАНИЯ

1.   На результат теста не влияет присутствие в пробе гемоглобина в концентрации до 0,5 г/л, билирубина в концентрации до 512 мкмоль/л, триглицеридов в концентрации до 17,1 ммоль/л и ревматоидного фак­тора до 100 МЕ/л.