Всероссийская научная конференция «Инфекционные осложнения при иммунодепрессии»

Нурмуканов А.С., ООО «Лабораторная Диагностика», г. Москва, РФ
Peter Naughton-Penn, "Biolog, Inc.", USA

Инструментальные средства для диагностики оппортунистических инфекций в клинике и осуществления контроля качества в фармацевтической индустрии

Задачи идентификации возбудителей инфекций, определения их спектра антибиотикочувствительности в клинической диагностике, а также контроля стерильности в производстве фармпрепаратов традиционно решаются с применением культуральных микробиологических методов. Их очевидные недостатки - трудоёмкость и длительность получения результатов, что заставляет обращаться к использованию современных инструментальных средств.

Оппортунистические инфекции при иммунодепрессии могут носить множественный характер, то есть характеризоваться поражением организма возбудителями сразу нескольких видов. Своевременное выявление и идентификация доминирующих возбудителей инфекционных осложнений и подбор рациональной антибиотикотерапии является залогом их успешного лечения. Однако множественный характер оппортунистических инфекций предъявляет особые требования к средствам решения этих задач. Большинство распространённых решений в этой области имеют ряд ограничений. Так, имеющиеся сегодня в распоряжении российских врачей системы идентификации микроорганизмов работают с достаточно ограниченным набором диагностических признаков (не более 50) идентифицируемых культур и имеют базы данных фенотипических профилей, как правило, ограниченные наиболее распространёнными патогенами, в то время как оппортунистические инфекции могут вызываться очень широким кругом микробных культур, в норме не патогенных и выходящих за рамки баз данных этих систем. В особенности данное утверждение справедливо для возбудителей микозов.

Средствами, практически лишёнными данных недостатков и совмещающими в себе функции идентификации микроорганизмов и тестирования антибиотикочувствительности чистых и смешанных культур, являются решения от компании BioLog (США). В основе всех систем BioLog лежит одна и та же технология - турбидиметрическая и колориметрическая детекция развития культур на различных субстратах или в присутствии определённых антимикробных препаратов с использованием редокс-индикатора, который реагирует на метаболическую активность клеток. Детекция роста культуры может проводиться как однократно, так и автоматически в динамике. Идентификация проводится на основании 95 различных фенотипических признаков на базе стандартных 96-луночных микропланшет, что обеспечивает высокую точность идентификации. С её помощью можно идентифицировать около 2000 видов микроорганизмов, включающих аэробные, анаэробные бактерии, дрожжи и мицелиальные грибы. Для этого существует 5 модификаций компоновки субстратов в микропланшетах и соответствующие базы данных к ним: GEN III - для идентификации более 1000 видов аэробных грамположительных и грамотрицательных бактерий (позволяет избежать предварительных и дополнительных уточняющих тестов, в том числе окраски по Граму, т.к. один и тот же планшет подходит для всех аэробных бактерий); GP2 - для грамположительных аэробных бактерий (более 500 видов); GN2 - для грамотрицательных аэробных бактерий (более 350 видов); AN - для анаэробных бактерий (более 350 видов); DP - для опасных патогенов (грамположительных и грамотрицательных, дополнительная база данных, совмещающаяся с GP2 и GN2); системы для идентификации дрожжей (более 250 видов) и мицелиальных грибов (более 600 видов; дополнена уникальной библиотекой полноцветных макро- и микрофотографий грибов). Кроме того, системы BioLog располагают средствами для оценки более чем 2000 фенотипических признаков клеток бактерий, дрожжей и мицелиальных грибов (Phenotype MicroArraysTM), что может быть полезно, например, при решении вопросов, связанных с внутрибольничными инфекциями. В рамках Phenotype MicroArrays также реализована возможность тестирования чувствительности чистых и смешанных микробных культур к более чем четырёмстам различным антибиотикам и антимикробным препаратам с одновременным определением минимальной ингибирующей концентрации (каждый тестируемый препарат представлен в планшетах в четырёх концентрациях). Наиболее удобной и максимально автоматизированной является система OmniLog+, также существует возможность ручного считывания результатов.

Специфика фармацевтического производства предъявляет высокие требования к обеспечению и контролю микробиологической чистоты технологического процесса и выпускаемых препаратов (в частности, инфузионных и инъекционных). Наиболее адекватным средством решения этой задачи является твердофазный цитометр для анализа фильтрующихся жидкостей ChemScanRDI компании Chemunex (Франция). Его действие основано на избирательном флюоресцентном окрашивании жизнеспособных клеток бактерий и/или грибов, иммобилизованных на мембране в процессе фильтрации через неё определённого (сколь угодно большого) объёма исследуемой жидкости, и детекции испускаемой ими люминесценции в сканирующем режиме. Чувствительность анализатора составляет 1 клетку в исследуемом объёме. Система может быть укомплектована микроскопом для визуального контроля детектируемых микроорганизмов и средствами автоматизации процесса подготовки препаратов к сканированию.