Остеокальцин (Фрагменты)
1 Принцип анализа
Это сэндвич-анализ с использованием двух антител. Антитела, полученные против 1-19 фрагмента иммобилизованного в лунках MICROTEST 96-луночного планшета. Образцы и биотинилированные моно-специфичные поликлональные антитела против 30-40 области инкубируют в луноках. После промывки, вторая инкубация делается с конъюгатом стрептавидин-пероксидаза хрена. Концентрация остеокальцина в образце пропорциональна поглощению, и значение может быть рассчитано по сравнению со стандартной калибровочной кривой, полученной в той же постановке.
2 Сылки / Литература
1. Garnero P., Grimaux M, Seguin P. and P.D. Delmas. Characterization of Immunoreactive Forms of Human
Osteocalcin in vivo and in vitro. J. of Bone & Mineral Res. 9(2): 255-264, 1994.
2. 2. Calvo, M.S.,Eyre,D.R. and Gundberg,C.M. Molecular Basis and Clinical Application of Biological
Markers of Bone Turnover. Endocrine Reviews 17(4):333-368, 1996
3. Kaigler D., Krebsbach P. H., West E.R., Horger K., Huang E-C., and D.J. Mooney. Endothellial Cell
Modulation of Bone Marrow Stromal Cell Osteogenic Potential. The FASEB Journal express art. 10.1096
(January 27, 2005)
4. Hotchkiss C.E., and C.P. Jerome. Evaluation of a nonhuman primate model to study circadian rhythms of
calcium metabolism. Am. J. Physiol. Regul. Comp. Physiol. 275: R494-R501, 1998.
3 Реагенты: Описание и подготовка
Все реагенты стабильны при 4 °C в течение 6 месяцев.
1. Разбавитель буфера. Флакон, 30 мл. Хранить при 4 °C, стабилен в течение 6 месяцев.
2. Фосфатно-солевой буфер концентрированный (Промывочный буфер). Флакон 100 мл. Разбавить содержимое с 500 мл дистиллированной воды. Хранить при 4 °C, стабилен в течение 6 месяцев.
3. Остеокальцин Стандарты. Пять флаконов, лиофилизированные.
Развести каждый флакон с 0,5 мл дистиллированной воды, (использовать 0,50 мл мерную пипетку), заменить пробки и оставить стоять в течение 5 минут. Смешать каждый флакон и повращать несколько раз, чтобы получился прозрачный раствор.
Храните эти восстановленные стандарты замороженными при температуре -20 ° С.(Стабильны в течение 6 месяцев).
Перед использованием необходимо, чтобы восстановленные стандарты оттаяли и нагрелись до комнатной температуры.
Выдерживает 2 цикла заморозки.
4. Остеокальцин. Антисыворотка Один флакон, 11 мл. Биотинилированные антитела к остеокальцину человека. Хранить при 4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.
5. Конъюгат стрептавидин-пероксидазы хрена. Один флакон, 11 мл. Хранить при 4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.
6. Субстрат пероксидазы (3,3',5,5' ТМБ). Один флакон. Хранить при 4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.
7. Раствор перекиси водорода Один флакон. Хранить при 4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.
8. Стоп-раствор (1M HCl +1M H3PO4) Один флакон, 11 мл. Хранить при 4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.
9. Остеокальцин человека. Контроли Два флакона,
Добавьте 200 мкл дистиллированной воды в каждый флакон, оставьте на 10 мин при комнатной температуре, аккуратно перемешайте, переворачивая. (Высокий контроль 25 нг/мл и низкий 5 нг/мл).
10. Один 96- луночный планшет (8 стрипов, легко разделяемых), Покрыт 1-19 моноклональными антителами
4 Материалы, необходимые для исследования, но не включенные в набор
1. Микроплашечный ридер (450 нм)
2. Микропипетки на 20 и 100 мкл, градуированная пипетка 0,5 мл
3.Устройство для промывки планшента
4. Инкубатор 37 °C
5. Дистиллированная вода
5 Меры предосторожности
Некоторые компоненты этого набора содержат изотиазолоны (5 ppm) в качестве консерванта.
Стоп-раствор содержит серную кислоту. Избегайте попадания компонентов на кожу и в глаза.
6 Сбор и подготовка проб
Все пробы (сыворотка, плазма, питательные среды, т.д) должны быть собраны и хранится при температуре - 20 °C. Для долговременного хранения (6-12 месяцев) нужно хранить при -70 °C. Образцы могут быть замороженны-размороженны не более 2 раз.
Сыворотка и гепаринизированная плазма - лучшие образцы крови.
Используйте разбавитель буфера для разведения образцов.
Бычий остеокальцин (присутствует в бычьей сыворотки) практически идентичен остеокальцину человека. И он лучше подходит для выращивания клеток в питательной среде, образцы надосадочной жидкости клеточной культуры, выращиваемой в течение 24-48 часов, годятся в качестве образцов.
7 Процедура анализа
Все реагенты должны быть комнатной температуры.
1.Пожалуйста, посмотрите пункт подготовки реагентов. Все реагенты должны быть комнатной температуры.
2. Выньте планшет из запечатанного пакета. Неиспользуемые стрипы сразу должны быть убраны из держателя и запечатаны в пакете для будущего использования.
3.Добавьте 25 мкл разбавителя буфера (нулевая лунка или пустая лунка), стандартов, образцов и контролей в соответствующие лунки, затем 100 мкл антисыворотки остеокальцина.
Планшет должен быть заполнен в течение 15 мин или быстрее. Аккуратно вращайте пластину около 1 минуты. Плотно закройте и инкубируйте 2,5 часа при температуре 37 ° С.
4. Резко вытряхните содержимое лунок и промойте пластины 3 раза с 0,3 мл фосфатно-солевого промывочного буфера.
5. Добавьте 100 мкл конъюгата во все лунки.
Перемешайте и потом инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут.
6. Перемешайте один объем раствора ТМБ субстрата с одним объемом раствора перекиси водорода и отложите. (Смешайте только количество, необходимое для используемых лунок в данной постановке).
7. Промойте также как в 4 пункте.
8.Немедленно добавьте 100 мкл субстрата во все лунки,
инкубируйте в темноте, при комнатной температуре 15 минут.
9. Добавьте 100 мкл стоп-раствора во все лунки, перемешайте и сразу измерьте ОП при 450 нм.
10. Запишите данные.
Примечание:
Добавляйте стоп-раствор в том же порядке, как и субстрат.
Перед началом измерений ОП, убедитесь, что на поверхности нет пузырьков воздуха, дно лунки чистое и сухое.
Используйте новые пластиковые насадки для дозатора для каждого стандарта, контроля и образца для предотвращения контаминации. Берите образцы и стандарты на дне лунок, реагенты - возле поверхности.
8 Подсчет результатов
- Подсчитайте средние величины абсорбции для каждого набора референс-стандартов, контролей и проб пациентов.
- Постройте стандартную кривую построением на оси координат: средняя величина абсорбции, полученная от каждого референс-стандарта против его концентрации в нг/млс величиной абсорбции на вертикальной оси(Y) и концентраци на горизонтальной оси(X).
- Используя среднюю величину абсорбции для каждого образца, определите соответствующую концентрацию пролактина в нг/мл от стандартной кривой. В зависимости от опыта и/или возможностей компьютера могут применяться другие методы обработки данных.
Всегда создавайте стандартную калибровочную кривую для каждого нового анализа.
9 Спецификация
Количество образца: 25 мкл
Время анализа: 3, 5 часа
Чувствительность: 0,5 нг/мл
Рабочий диапазон: 1,0 – 50 мг/мл (450 нм)
Интра-анализ вариации: 7,0 % (95 % ограничение)
Интер-анализ вариации: 10,0 % (95 % ограничение)
Интервал для взрослых мужчин и предменопаузальных женщин: 2,5 - 14 нг/мл
Хук-эффект при > 250 нг/мл.
Информация для заказа
| Область использования: | Производство: | DRG |
| Метод: | ELISA |
| Объем: | 96 |
| Кат. номер: | EIA1733 |
| Цена (с НДС 10%): | по запросу | В корзину  |
 Наименование: Остеокальцин (Фрагменты).
Примечание: |
