Набор для измерения белков клеток-хозяев E. coli (Immunoenzymetric Assay Kitforthe Measurementof E. coli HostCellProteins)
E-coli-HRP HCP ELISA
E.coli HCP ELISA kit (Cygnus Technologies, Inc.)
This kit was developed using broadly reactive polyclonal antibodies to the hundreds of different HCPs and is intended for use in determining the presence of E.coli host cell protein contamination in products manufactured by recombinant expression. Our assay validation has determined that the LOD for this kit is ~0.2ng/mL.
Интсрукция (PDF)
Рекомбинантная экспрессия в E. coli является относительно простым и экономичным методом производства определенных белков. Многие из этих продуктов предназначены для использования в качестве терапевтических средств у людей и животных и поэтому должны быть высокоочищены. Процесс производства и очистки этих продуктов оставляет возможность заражения белками клетки-хозяина (БКХ) E. coli. Такое загрязнение может снизить эффективность терапевтического агента и привести к неблагоприятным токсическим или иммунологическим реакциям, поэтому желательно снизить загрязнение БКХ до минимально возможного уровня. Традиционно приняты иммунологические методы с использованием антител к БКХ, такие как вестерн-блоттинг и ИФА. Хотя вестерн-блоттинг является полезным методом, помогающим идентифицировать HCP, он имеет ряд ограничений. Вестерн-блоттинг представляет собой сложную и зависящую от техники процедуру, требующую субъективной интерпретации результатов. Кроме того, это по существу качественный метод, который не позволяет получить количественные ответы. Чувствительность вестерн-блоттинга сильно ограничена объемом пробы, которую можно протестировать, а также наличием высоких концентраций целевого продукта. В то время как вестерн-блоттинг может обнаруживать БКХ в образцах, взятых выше по течению в процессе очистки, ему часто не хватает адекватного чувствительность и специфичность для обнаружения HCP в очищенном нисходящем и конечном продукте. Используемый в этом наборе метод иммуноферментного анализа на микротитрационных планшетах (ELISA) преодолевает ограничения вестерн-блоттинга, обеспечивая в 100 раз более высокую чувствительность. Этот простой в использовании, высокочувствительный, объективный и полуколичественный ИФА является мощным методом, помогающим в разработке оптимального процесса очистки, управлении процессом, рутинном контроле качества и тестировании выпуска продукции. Этот комплект является «универсальным» в том смысле, что он предназначен для реагировать практически со всеми HCP, которые могут загрязнить продукт, независимо от процесса очистки. Антитела были созданы против и аффинно очищены с использованием смешанного лизата E. coli из различных штаммов, включая обычно используемые штаммы DH5α и BL21. Эта относительно мягкая процедура лизирования предназначена для получения БКХ, обычно встречающихся на начальных этапах выделения продукта, таких как осветление кондиционированных сред, когда продукт секретируется, или после осмотического шока или мягкого детергента и механического разрушения для получения телец включения и других внутриклеточных белков. Вестерн-блоттинг был использован в качестве предварительного метода и установил что антитела реагировали на большинство полос БКХ, разрешенных с помощью разделения в ПААГ. Если вам нужен более чувствительный и специфичный метод для демонстрации реакции на отдельные HCP в ваших образцах, Cygnus Technologies рекомендует метод, который, по нашему мнению, превосходит 2D вестерн-блоттинг. Мы называем этот метод 2D HPLC-ELISA. 2D ВЭЖХ-ИФА может обеспечить гораздо лучшую чувствительность и специфичность по сравнению с 2D вестерн-блоттингом. Для получения дополнительной информации об этом анализе 2D HPLC-ELISA, пожалуйста, свяжитесь с нашим отделом технической поддержки. При получении этих антител использовали специальные процедуры, чтобы обеспечить присутствие низкомолекулярных и менее иммуногенных контаминантов, а также компонентов с высокой молекулярной массой. Таким образом, этот набор можно использовать в качестве инструмента разработки процесса для мониторинга оптимального удаления загрязняющих веществ из клеток-хозяев, а также для рутинных испытаний выпуска конечного продукта. Из-за высокой чувствительности и широкой реактивности антител этот общий набор успешно прошел валидацию для тестирования HCP конечного продукта во многих различных продуктах, независимо от процесса выращивания и очистки. Когда набор может быть удовлетворительно валидирован для ваших образцов, применение анализа, более специфичного для конкретного процесса, может не понадобиться, поскольку такой анализ предоставит только информацию, избыточную для этого общего анализа. Однако, если ваши проверочные исследования показывают, что антитела в этом наборе недостаточно реактивный с вашими специалистами по технологическому процессу, может быть желательно также разработать более специфичный для технологического процесса ИФА. Этот анализ более позднего поколения может потребовать использования более специфичной и определенной антисыворотки. В качестве альтернативы, если поликлональное антитело, используемое в этом наборе, обеспечивает достаточную чувствительность и широкую антигенную реактивность, можно заменить стандарты, используемые в этом наборе, стандартами, изготовленными из загрязнителей, которые обычно совместно очищаются в ходе вашего процесса очистки и, таким образом, достигают большей точности. для конкретного процесса медицинские работники. Пригодность этого набора для данного типа образца и продукта должна быть определена и подтверждена экспериментально в каждой лаборатории. Теоретически использование специфичного для процесса анализа с более определенными антигенами и антителами может обеспечить более высокую чувствительность, однако такой анализ сопряжен с риском быть слишком специфичным, поскольку он может не обнаружить новые или нетипичные загрязнители, которые могут возникнуть в результате некоторой неравномерности или изменения процесса. . По этой причине рекомендуется
Информация для заказа
| Область использования: | Производство: | Cygnus Technology |
| Метод: | ELISA |
| Объем: | |
| Кат. номер: | F410 |
| Цена (с НДС 20%): | по запросу | В корзину  |
Наименование: Набор для измерения белков клеток-хозяев E. coli (Immunoenzymetric Assay Kitforthe Measurementof E. coli HostCellProteins) / E-coli-HRP HCP ELISA .
Примечание: |
