Определение группы крови у собак

Анализ на определение группы крови RapidVet для проведения в лабораторных условиях Dog

Определение группы крови у собак

Для применения в лабораторных условиях

Просьба внимательно прочесть и соблюдать последовательность этапов.

Вещества, лиофилизованные в лунках с положительным контролем и с пробой пациента, неодинаковы.
Результаты анализа получены только с использованием пробы крови пациента, как в лунке с положительным контролем, так и в лунке с пробой пациента.

Описание и назначение:

Хотя общеизвестен факт, что у собак нет изоантител к несовместимым группам крови, и поэтому они в целом хорошо переносят переливание крови при несовместимости групп, но рациональная ветеринарная практика призывает избегать переливания несовместимых групп крови, за исключением неотложных состояний. Период полувыведения переливаемых несовместимых клеток будет довольно непродолжителен, и поэтому возможно, что должный терапевтический результат не будет достигнут. Также необходимо учитывать потенциальные потребности пациента в будущем. Антитела, получаемые от переливания несовместимой крови, могут образоваться только спустя 5-7 дней, и будут обладать долговременной жизнеспособностью. Это исключает возможность использовать в последствии несовместимую кровь при критическом положении.
К тому же, специалисты по разведению животных должны обратить особое внимание на антитела, вырабатываемые у самок при сенсибилизации в результате переливания крови несовместимых групп. Так как антитела присутствуют в молозиве, то самки с антителами к определенной группе крови не должны скрещиваться с самцами с этой группой крови, если предполагается, что они будут выкармливать будущих щенят. У грудных щенят разовьется гемолиз, обусловленный наличием изоантител, и они могут быть восприимчивы к заболеванию или даже умереть в результате гемолитической анемии. На поверхности эритроцитов собак идентифицированы восемь специфических антигенов. На этих антигенах основывается принятая во всем мире система групповых антигенов крови у собак, «DEA» (Dog Erythrocyte Antigen = Эритроцитарный Антиген Собак). В ней характеризуются восемь общих групп крови, антигены DEA 1.1, 1.2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8.
DEA 1.1, 1.2 – наиболее значимые антигены в крови собаки. Оба они высокоаллергенны, но DEA 1.1 – основной литический фактор в гемотрансфузиологии собак. Хотя все группоспецифические антигены системы АВ0 могут стимулировать образование изоантител, DEA 1.1 обладает сильнейшим стимулирующим потенциалом. Поэтому большинство реакций в результате переливания несовместимых клеток происходит, когда DEA 1.1-положительная кровь дается DEA 1.1- отрицательному реципиенту. Клинические значимые реакции при DEA 1.2 могут возникнуть, но слабее, чем при DEA 1.1. DEA7 может быть фактором при трансфузионных реакциях, но так как это холодовый агглютинин и изоантитело природного происхождения, считается, что у него очень низкая клиническая значимость. Считается, что оставшиеся антигены вызывают клинически незначительные проблемы при переливании.
В идеале предполагается, что вся переливаемая кровь DEA 1.1 и 1.2-отрицательная. Некоторые породы, например, борзые, особенно подходят в качестве доноров в связи с тем, что антигены DEA 1.1, DEA 1.2 и DEA 7 встречаются редко. Тем не менее, пока повсеместно не принята концепция банка собачьей крови, при которой кровь можно было бы приобрести незамедлительно, нормой остается переливание от собак, которые представлены в регионе в нужное время.
По оценкам 40% всех собак - DEA 1.1-положительные. Поскольку у некоторых собак происходит аутоагглютинация, и поскольку от очень анемичной собаки могут получиться сомнительные результаты, то прежде чем получать какую-либо информацию, показано типирование. Определение у собаки DEA 1.1-положительность либо отрицательность при рождении намного упрощает принятие решения в будущем. DEA 1.1-положительная собака может получать как DEA 1.1-положительную, так и отрицательную кровь. DEA1.1-отрицательная собака не должна получать DEA1.1-положительную кровь. RapidVet-H (Canine 1.1) предназначен для использования при классификации собак на DEA 1.1-положительных и отрицательных.

Условия проведения процедуры:

Для получения точных результатов очень важно соблюдать последовательность операций.
Всегда использовать новую пипетку для нового образца и новую мешалку для новой лунки. Повторное использование любого средства приведет к перекрестной контаминации и неточным результатам.
Отдельные компоненты системы имеют разную стабильность. Хранить компоненты в соответствии с указаниями на маркировке. Не использовать компоненты после истечения указанного срока годности. Использование материалов с истекшим сроком годности может стать причиной недостоверных результатов.
Разбавитель поставляется в бутылке с резьбовой крышкой для того, чтобы свести к минимуму непреднамеренное бактериальную либо иную контаминацию. Не использовать разбавитель из других источников в лаборатории.
Механическая целостность пробы пациента крайне важна для правильности результатов.
Всегда забирать полный шприц или пробирку с содержанием ЭДТА. Меньшее количество крови приведет к высокой концентрации ЭДТА в анализируемом образце.

Известные мешающие вещества: нет
Утилизация: Все биологические материалы, пипетки и мешалки утилизировать безопасным способом в соответствии со стандартами

Принцип и интерпретация анализа:

Анализ RapidVet-H (Canine DEA1.1) основан на реакции агглютинации, которая происходит, когда эритроцит, содержащий антиген DEA 1.1 на мембране поверхности взаимодействует с мышиным моноклональным антителом, специфичность которого к DEA 1.1 доказана, которое лиофилизуется на тестовой плате. Моноклональное антитело повторно растворяется разбавителем до формы антисыворотки, и тщательно перемешивается с цельной кровью пациента. Все DEA 1.1-положительные эритроциты реагируют с антисывороткой, вызывая агглютинацию. Антисыворотка совершенно не реагирует со всеми DEA 1.1-отрицательными эритроцитами. Результаты определяются визуально.

Внимание: У некоторых собак проявляется аутоагглютинация разной степени в связи с сывороточными факторами, которые вызывают у пациента агглютинацию собственных эритроцитов. Если это проявляется у пациента в опытных условиях, то этого пациента невозможно будет определенно типировать без выделения сыворотки и последовательной промывки оставшихся эритроцитов перед проведением анализа. В RapidVet-H (Canine DEA 1.1) имеется лунка для скрининга таких пациентов.

Реагенты и материалы:

Платы для агглютинационной пробы. На каждой плате имеется 3 визуально определяемых лунки, обозначенных как "Солевой скрининг на аутоагглютинацию", "DEA 1.1 положительный контроль" и "Проба пациента". Платы упакованы в индивидуальную упаковку с этикеткой, в каждой содержится пакет с осушителем. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C). 1 бутылка с разбавителем. Прозрачная пластиковая бутылка содержит 0.02 моль/л фосфатного буфера (ФСБ) с pH 7.4. Капельный наконечник дозирует 50 мкл. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C).
Пипетки и мешалки. В каждом полиэтиленовом пакете содержатся пластиковые пипетки и мешалки.

Хранение и стабильность:

Платы для агглютинационной пробы стабильны при комнатной температуре (20-25°C) в течение 19 месяцев с даты изготовления. На каждой тестовой плате пропечатана дата истечения срока годности. Хранение в холодильнике (2-7°C) существенно не увеличивает период стабильности, но не оказывает отрицательного влияния на анализ и защищает от неожиданных или даже неустановленных изменений комнатной температуры вне данного диапазона. Нет необходимости выдерживать тестовую плату при комнатной температуре перед использованием.
Разбавитель стабилен 24 месяца с даты изготовления. На каждой бутылке нанесена дата истечения срока годности.

ПРИМЕЧАНИЕ: На каждой тест-системе RapidVet-H (Canine 1.1) напечатана дата истечения срока годности, которая представляет собой ближайшую дату истечения срока годности среди компонентов системы. Не смотря на то, что у некоторых компонентов индивидуальные даты истечения срока годности могут быть позднее, их применение с другими компонентами из других систем не рекомендуется.

Последовательность операций:

ЗАБРАТЬ у пациента минимум 0.4 мкл. крови в шприц или в пробирку, покрытую любо содержащую ЭДТА в качестве антикоагулянта. Для анализа требуется всего 100 мкл. цельной крови.
ДОСТАТЬ тестовую плату из пластиковой упаковки.
НАПИСАТЬ на плате кличку/номер собаки и дату проведения анализа.
ПОМЕСТИТЬ тестовую плату на плоскую поверхность.
ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию".
ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию". Эта лунка не содержит реагентов. С помощью мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд. (См. Примечание 1 по правильному использованию пипетки). У небольшого процента больных собак и здоровых собак происходит аутоагглютинация. Если наблюдается аутоагглютинация, ПРЕКРАТИТЬ анализ и перед тем, как продолжить, провести стандартную процедуру промывки клеток.
ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в каждую из 2 оставшихся лунок. Разбавитель помогает при реконструкции лиофилизованного материала в контрольной лунке и в лунке пациента.
ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Положительная проба", и 1 каплю – в лунку, обозначенную "Проба пациента". С помощью новой мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ, распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд.
ПОТРЯСТИ плату поперечным движением в течение 2 минут, обеспечивая перемешивание и "переворачивание" материалов внутри каждой лунки.
УСТАНОВИТЬ плату под углом 20-30 ° на 2 минуты, чтобы избыток крови сбежал вниз лунки. Этому поспособствует размещение пакета с осушителем в верхней части платы.
СЧИТАТЬ результаты и отметить лунки, в которых произошла явная агглютинация.

ПРИМЕЧАНИЕ 1: Использование пипетки: Удерживать пластиковую часть между большим и указательным пальцами у плоского заделанного конца, плотно нажать и не ослаблять давление. Удерживать часть для образца вертикально, поместить открытым концом пластиковой части ниже поверхности образца. Ослабить давление пальцев и забрать пробу. Далее удерживать пипетку в перпендикулярном положении прямо над лункой, в которую доставляется проба. Слегка нажать и выпустить одну каплю в лунку (50 мкл.). Дизайн пипетки таков, что выделяется немного более 50 мкл. для компенсации того небольшого количества образца, которое остается на мешалке.
Каждую пипетку использовать один раз, затем утилизировать. Ни при каких обстоятельствах не использовать пипетку повторно, так как может возникнуть перекрестная контаминация, приводящая к неточности результатов анализа.

Результаты:

Если анализ проведен правильно, в лунке, обозначенной "DEA1.1 Положительный контроль", должна произойти визуально определяемая, явная агглютинация.

ПРИМЕЧАНИЕ: Единственное назначение лунки "DEA 1.1 Положительный контроль" – контролировать правильность проведения анализа. Материал, лиофилизованный в лунке "DEA1.1 Положительный контроль" не тот же, что в лунке "Проба пациента".
Если проявляется явная агглютинация пробы пациента в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-положительный. Если визуально не обнаружено агглютинации в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-отрицательный. Любая мелкозернистость, гранулярность, появляющаяся спустя 2 минуты, не учитывается при определении результатов. Скорость агглютинации и размер сгустков клеток у DEA 1.1-положительных пациентов может быть разной. В отличие от людей, некоторые животные могут обладать более чем одной первичной группой крови. В таком случае эритроциты могут нести антигены по каждой такой группе. Такое животное будет нести меньше антигенов DEA 1.1, чем животное, у которого в качестве первичной группы крови только DEA 1.1.
Если пациент очень анемичен, то агглютинация образца может быть разъединенной, в форме небольших скоплений, каждое с головку большой булавки, а не в виде явной агглютинации.

Информация для заказа

Область использования: Прочие ИФА наборы для животных	Производство:	Agrolabo S.p.A., Италия
	Метод:
	Объем:	20 тестов
	Кат. номер:	RAPIDVET-H САNIS
Цена (с НДС 20%):	по запросу	В корзину
Наименование: Определение группы крови у собак / Анализ на определение группы крови RapidVet для проведения в лабораторных условиях Dog. Примечание: Анализ на определение группы крови RapidVet-H у собак