Наборы зондов от производителя MRC-Holland

Для использования в сочетании с программным обеспечением для анализа данных Coffalyser.Net.

наборы реагентов поставляются с праймером для ПЦР, меченным красителем FAM или Cy5.0, подходящим для Applied Biosystems. и капиллярным секвенаторам Beckman/SCIEX.

Принцип работы наборов MLPA

Датчики MLPA

Зондовые миксы MLPA имеют зонды, которые нацелены на определенную геномную последовательность. Зонд MLPA состоит из двух частей: левого и правого зонда олигонуклеотида (LPO и RPO). LPO и RPO содержат праймер ПЦР и последовательности гибридизации ДНК. Дополнительная последовательность наполнителей в RPO дает каждому зонду уникальную длину.

Денатурация образцов и гибридизация зондов

На первом этапе очищенный образец ДНК денатурируется. За этим следует инкубация с олигосомами зонда MLPA. Части LPO и RPO каждого зонда гибридизируются с непосредственно смежными целевыми последовательностями ДНК.

Зондовое лигирование

Вторым этапом является лигирование зондовых олигомеров, которые гибридизировались с непосредственно соседними целевыми последовательностями. Никакие несоответствия вокруг места лигирования не допускаются, что делает реакцию перевязки очень специфичной. Количество продуктов зондового лигирования является мерой количества целевых последовательностей в образце.

Зондовое усиление

На третьем этапе лигированные зонды усиливают в мультиплексной ПЦР с использованием одной универсальной пары праймеров. Только лигированные зонды экспоненциально усиливаются, что делает ненужным удаление несвязанных и нелигированных зондов.

Разделение фрагментов

Четвертый этап – разделение фрагментов капиллярным электрофорезом. Продукты ПЦР загружаются на устройство капиллярного электрофореза и разделяются по длине. Каждый фрагмент соответствует определенному зонду MLPA.

Анализ данных

Заключительным этапом является анализ данных по Coffalyser.Net™. Относительные числа копий определяются путем сравнения относительных пиковых высот эталонных зондов и целевых зондов в тестовых образцах с показателями в эталонных образцах с известным нормальным номером копии. Расширенные проверки качества помогают распознавать ненадежные данные.

Наименование	Объем	Производство	Метод	Кат.Номер
Набор SALSA MLPA Probemix P060 SMA Carrier, 50 тест. (MRC-Holland )		---		P060-050R
Набор зондов SALSA MLPA для детекции мутаций, ассоциированных с различными наследственными нейромышечными и скелетными заболеваниями		---		P214-050R