Альдолаза (Aldolase)

Aldolase

Альдолаза – это фермент, находящийся во всех органах и тканях организма, но особенно много этого фермента присутствует в мышечной ткани. Альдолаза используется для превращения глюкозы в энергию и бывает 3 типов: А, В, С.

Повышенный уровень альдолазы сигнализирует о разрушении клеток какого-либо органа или ткани. Например, ее уровень повышается в крови людей, страдающих от заболевания скелетных мышц (мышц, управляющих движением костей скелета). Когда они повреждаются, что происходит при мышечной дистрофии, из разрушенных клеток в кровь выбрасываются некоторые компоненты, среди которых есть и альдолаза. Это приводит к повышению ее уровня в крови.

Фасовка (фл х мл): R1 5x20, R2 2х1, R3 1х0.5, S-UV

Материал: Сыворотка или плазма (ЭДТА и гепарин)

Метод измерения: Кинетическое определение активности

Адаптации: Hitachi 911, Roche Cobas C311 6000/8000, BC AU-series, Siemens, Dimension, Ortho Vitros

Кинетическое определение активности альдолазы в сыворотке и плазме.

КОЛИЧЕСТВО в наборе: N по каталогу 17003 100 мл

НАЗНАЧЕНИЕ

Определение альдолазы в сыворотке имеет большое клиническое значение при исследовании причин патологии скелетных мышц. Значительное увеличение уровня альдолазы может наблюдаться при мышечной дистрофии Дюшена. Менее выраженное увеличение встречается при дерматомиозитах и полимиозитах.

МЕТОД

Альдолаза расщепляет фруктозо-1,6-дифосфат до глицеральдегид-3-фосфата и дигидроксиацетофосфата. Добавление триозофосфатизомеразы, глицеролфосфатдегидрогеназы и НАДН превращает дигидрокси-ацетофосфат в глицерол-1-фосфат. Изменение оптической плотности при 340 нм, обусловленное образованием НАД+ из НАДН, пропорционально активности альдолазы в пробе.

1. Реагент 1 (лиоф) 5 х 20 мл

Коллидиновый буфер (рН = 7,4) 51 ммоль/л

Монойодацетат 0,27 ммоль/л

Фруктозо-1 ,6-дифосфат 2,7 ммоль/л

Азид натрия < 0,1%

2. Реагент 2 (лиоф) 2 х 1 мл

НАДН 12 ммоль/л

3. Реагент 3 1 х 0,5 мл

Глицеролфосфатдегидрогеназа >80 Е/мл

Триозофосфатизомераза >1000 Е/мл

Лактатдегидрогеназа >150 Е/мл

Сульфат аммония >40%

ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ

В нераспечатанных флаконах реагенты стабильны вплоть до указанной даты при хранении 2...8°С.

Раствор R1: добавьте 20 мл дистиллированной воды во флакон с реагентом 1. Оставьте на 10 минут, осторожно перемешайте. Раствор сохраняет стабильность в течение 15 дней при хранении 2...8°С.

Раствор R2: добавьте 1 мл дистиллированной воды во флакон с реагентом 2. Оставьте на 1 0 минут, осторожно перемешайте. Раствор сохраняет стабильность в течение 30 дней при хранении 2...8°С.

Реагент 3 готов к применению. Реагент сохраняет стабильность в течение 1 20 дней после вскрытия при хранении 2...8°С..

Стабильность реагентов и растворов обеспечивается при отсутствии загрязнения. Флаконы закрывайте крышками сразу после использования.

ПРОБЫ

Сыворотка, плазма (гепарин, ЭДТА). Не допускайте гемолиза. Стабильность: 15 дней при хранении 2...8°С.

УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЯ

Длина волны :340 (334-365) нм

Оптический путь :1 см
Температура :37°С

Измерение :кинетическое, против собственной холостой пробы;

реакция с уменьшением оптической плотности.

СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до 37°С. Температура должна быть стабильной (+/- 0,5°С) в течение всего определения.

Пропорциональное изменение объемов реагентов и пробы не влияет на конечный результат.

Добавить в кюветы (мкл)	Холостая проба	Опытная проба
Проба	200	200
Раствор R1	-	2500
Физ. раствор	2500	-
Раствор R2	-	50
Реагент 3	-	10

Тщательно перемешать, инкубировать 5 минут при 37°С. Измерить оптическую плотность опытной пробы А1 против холостой пробы. Инкубировать точно 20 минут при 37°С. Измерить оптическую плотность опытной пробы А2 против холостой пробы. Рассчитать разность ДА = А1 - А2.

Если А1 меньше 0,95 разведите пробу 1+1 физиологическим раствором и повторите исследование. Полученный результат умножьте на 2.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

Рассчитать активность альдолазы в пробе по следующей формуле:

Е/л пробы = 54,8 х ДА (340 нм) Фактор рассчитан только для приведенных выше условий проведения реакции.

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ

Диапазон измерений 1 - 30 Е/л. Если активность фермента превышает 30 Е/л, добавьте к 0,1 мл исходной пробы 0,9 мл физиологического раствора и повторите исследование. Полученный результат умножьте на 10 (коэффициент разведения).

РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ

Сыворотка, плазма: до 7,6 Е/л.

Рекомендуется каждой лаборатории устанавливать свой собственный диапазон нормальных значений.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для проведения контроля качества рекомендуется использовать контрольные сыворотки с аттестованными для этого метода значениями альдолазы.

Информация для заказа

Область использования: Биохимические наборы	Производство:	Sentinel
	Метод:	кинетический
	Объем:	(фл х мл): R1 5x20, R2 2х1, R3
	Кат. номер:	S/17003Н
Цена (с НДС 10%):	по запросу	В корзину
Наименование: Альдолаза (Aldolase) / Aldolase. Примечание: