Липаза

Кинетическое колориметрическое определение активности липазы в сыворотке и плазме.

КОЛИЧЕСТВО в наборе: N по каталогу 17401B   48 мл

НАЗНАЧЕНИЕ

Липаза в основном образуется в поджелудочной железе, в небольшом количестве секретируется слюнными железами, а также слизистой желудка, кишечника и легких. Исследование липазы используется при диагно­стике и лечении заболеваний поджелудочной железы, таких как острый и хронический панкреатит и нару­шение проходимости протоков.

МЕТОД

Метод основывается на расщеплении липазой специфического хромогенного субстрата, приготовленного в виде мелкодисперсной эмульсии (эфир 1,2-о-дилаурил-рак-глицеро-3-глутаровой кислоты с 6 -метил резо-руфином). В присутствии колипазы, ионов кальция и желчных кислот, которые являются специфическими активаторами панкреатической липазы, субстрат превращается в 1 ,2-о-дилаурил-рак-глицерин и эфир глу-таровой кислоты с 6-метилрезоруфином, причем последний самопроизвольно расщепляется на глутаровую кислоту и метилрезоруфин. Оптическая плотность при 580 нм, обусловленная образованием метилрезору-фина, пропорциональна активности липазы в пробе.

СОСТАВ НАБОРОВ

1. Реагент 1.  4 х 10 мл

Трис буфер (рН = 8,3)  40 ммоль/л

Колипаза  > 1 мг/л

Дезоксихолат > 1,8 ммоль/л

Тауродезоксихолат  > 7,0 ммоль/л

2. Реагент 2. 1 х 8 мл

Тартратный буфер (рН = 4,0)  15 ммоль/л

Субстрат липазы > 0,7 ммоль/л

Ионы кальция > 1 ммоль /л

3. Калибратор (лиофилизированный). 1 х 1 мл

Активность липазы в Е/л указана на этикетке флакона.

ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ

Реагенты готовы к применению.

В нераспечатанных флаконах реагенты стабильны вплоть до указанной даты при хранении 2...8°С. После вскрытия реагенты сохраняют стабильность в течение 90 дней при хранении 2...8°С. Избегать загрязнения реагентов.

Калибратор: добавьте во флакон с калибратором 1 мл дистиллированной воды. Тщательно перемешайте до полного растворения.

Разведенный калибратор сохраняет стабильность 7 дней при хранении 2...8°С. Калибратор можно разлить на порции и заморозить при -20°С. Хранить при -20°С в течение 3 месяцев.

Стабильность реагентов и калибратора обеспечивается при отсутствии загрязнения. Флаконы закрывайте крышками сразу после использования.

ПРОБЫ

Сыворотка, плазма (гепаринат лития, натрия, аммония).

Активность липазы в плазме и сыворотке сохраняется в течение 7 дней при температуре хранения 2...8°С.

УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЯ

Длина волны  580 (570-590) нм

Оптический путь 1 см

Температура 37°С

Измерение: кинетическое, реакция с увеличением оптической плотности

СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до 37°С. Температура должна быть стабильной (+/- 0,5°С) в течение всего определения.

Добавить в кюветы (мкл)	Холостая проба	Калибровочная проба	Опытная проба
Дистиллированная вода	10	-	-
Проба	-	-	10
Калибратор	-	10	-
Реагент 1	1000	1000	1000
Реагент 2	200	200	200

Тщательно перемешать и запустить секундомер. Измерить против дистиллированной воды оптическую плотность холостой пробы, опытной пробы, калибратора ровно через 1 минуту. Повторить измерения 2 раза с интервалом 1 минуту.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

Вычислить среднее изменение оптической плотности за 1 минуту (АА/мин) для холостой пробы (АА хол), опытной пробы (АА пробы) и калибратора (АА калиб). Рассчитать активность липазы в пробе по следующей формуле:

Е/л пробы = [Е/л] калиб х (AA пробы - АА хол) / (АА калиб - АА хол)  

[Е/л] калибратора - активность липазы в калибраторе.

Пропорциональное изменение объемов реагентов и пробы не влияет на конечный результат.

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ

Диапазон измерений 5 - 250 Е/л. Если активность фермента превышает 250 Е/л, добавьте к 0,1 мл исход­ной пробы 0,9 мл физиологического раствора и повторите исследование. Полученный результат умножьте на 1 0 (коэффициент разведения).

РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ

Сыворотка / плазма - до 38 Е/л.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для проведения контроля качества рекомендуется использовать контрольные сыворотки с аттестованными для этого метода значениями липазы.

ПРИМЕЧАНИЯ

1 .  Активность липазы в калибраторе, измеренная по методу с использованием в качестве субстрата ме-тилрезоруфина, может быть преобразована в активность, рассчитанную для турбидиметрического ме­тода, где субстратом является триолеин (метод Roche). Для этого достаточно приведенное на этикетке значение умножить на пересчетный фактор 6,2.

2.     Реагент 1 должен быть прозрачными, не допускается использование мутного реагента.

Реагент 2 представляет собой мелкодисперсную эмульсию оранжевого цвета; не используйте реагент, если цвет эмульсии поменялся на красный. При температуре хранения ниже 2°С во флаконе с реаген­том может образоваться осадок, который не влияет на характеристики реагента, тем не менее, реко­мендуется перед проведением анализа перемешать содержимое флакона круговыми движениями.

Приготовленный калибратор должен быть прозрачным, не используйте мутный калибратор.

На результат теста не влияет присутствие в пробе гемоглобина в концентрации до 1,5 г/л и билирубина в концентрации до 342 мкмоль/л. Триглицериды в концентрации свыше 3,4 ммоль/л снижают активность липазы приблизительно на 6%.

Информация для заказа

Область использования: Биохимические наборы	Производство:	Sentinel
	Метод:	кинетический
	Объем:	4x10; 1x8
	Кат. номер:	S/17401B
Цена (с НДС 10%):	по запросу	В корзину
Наименование: Липаза. Примечание: