Холинэстераза

Определение активности холинэстеразы в сыворотке, плазме согласно рекомендации DGKC.

КОЛИЧЕСТВО в наборе:      N по каталогу 17019A                                    120 мл

НАЗНАЧЕНИЕ

Существует две разновидности холинэстеразы, которые различаются по типу субстрата, локализации в ор­ганах и тканях и биологической роли в организме. Холинэстераза (АХЭ) или ацетилхолин ацетилгидролаза (ЕС 3.1.1.7) содержится в эритроцитах, легких, селезенке и сером веществе мозга. Псевдохолинэстераза (ХЭ) полное название - ацилхолин ацилгидролаза (ЕС 3.1.1.8) содержится в сыворотке, печени, поджелу­дочной железе, сердце и белом веществе мозга. Определение сывороточной холинэстеразы (ХЭ) исполь­зуется при диагностике заболеваний печени (гепатитов, циррозов, метастазов опухолей и др.). Во всех ука­занных случаях активность холинэстеразы снижается, такая же реакция наблюдается и при назначении сукцинилхолина или в случае интоксикации пестицидами.

МЕТОД

В качестве специфического субстрата для холинэстеразы в данном методе используется бутирилтиохолин. Холинэстераза катализирует гидролиз бутирилтиохолина с образованием бутирата и тиохолина. Тиохолин восстанавливает железо (III) в гексацианоферрате до (II).Снижение оптической плотности раствора прямо пропорционально активности холинэстеразы в пробе.

СОСТАВ НАБОРОВ

1. Реагент 1. 2 х 50 мл

Фосфатный буфер (рН = 7,6)  92 ммоль/л

Гексацианоферрат (III) 2,5 ммоль/л

2. Реагент 2. 1 х 20 мл

Бутирилтиохолин 91 ммоль/л 

ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ

Реагенты готовы к применению.

В нераспечатанных флаконах реагенты стабильны вплоть до указанной даты при хранении 2...8°С. После вскрытия реагенты сохраняет стабильность в течение 90 дней при хранении 2...8°С. Стабильность реагентов обеспечивается при отсутствии загрязнения. Флаконы закрывайте крышками сразу после использования.

ПРОБЫ

Свежесобранная сыворотка, плазма (гепарин, ЭДТА) без гемолиза. Быстро отделить от клеток. Не приме­няйте фторид натрия в качестве антикоагулянта, поскольку он блокирует активность холинэстеразы. Стабильность холинэстеразы в пробе - 15 дней при хранении 2...8°С.

УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЯ 

Длина волны 405 нм

Оптический путь 1 см

Температура 37°С

Измерение: кинетическое, реакция с уменьшением оптической плотности

СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до 37°С. Температура должна быть стабильной (+/- 0,5°С) в течение всего определения. 

Добавить в термостатированную кювету (мкл)	Бланк по реагенту	Опытная проба
Дистиллированная вода	20	-
Проба	-	20
Реагент 1	1000	1000
Перемешать, инкубировать 5 минут при 37°С.
Реагент 2	200	200

Тщательно перемешать, инкубировать 90 секунд. Измерить оптическую плотность бланка по реагенту и опытной пробы; повторить измерения точно через 30, 60, 90 секунд. Рассчитать среднее ДА / 30 сек.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

Расчет активности холинэстеразы в пробе производится следующим образом:

Активность холинэстеразы Е/л (37°С) = (АА/30 среднее пробы - АА/30 среднее бланка) х 131,6х10³

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ

Диапазон измерений: 1 60 - 25000 Е/л. Если активность фермента в пробе превышает 25000 Е/л (если АА/30 больше 0,190), добавьте к 0,1 мл исходной пробы 0,9 мл физиологического раствора и повторите исследование. Полученный результат умножьте на 1 0 (коэффициент разведения).

РЕФЕРЕНТНЫЕ ПРЕДЕЛЫ

Взрослые (37°С)
Мужчины	5100 - 11700 Е/л
Женщины	4000 - 12600 Е/л

У детей до 6 месяцев активность холинэстеразы может быть на 40-50% выше, чем у взрослых. Активность холинэстеразы у молодых женщин составляет 64-75% от активности взрослых мужчин. Во время беременности активность холинэстеразы снижается.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для проведения контроля качества рекомендуется использовать контрольные сыворотки с аттестованными для этого метода значениями холинэстеразы.

ПРИМЕЧАНИЯ

1 .   Присутствие в пробе гемоглобина в концентрации до 5,0 г/л, билирубина в концентрации до 342 мкмоль/л и триглицеридов в концентрации до 8,6 ммоль/л оказывает незначительное влияние на ре­зультат (интерференция не более 5%).

2.   Реагенты должны быть прозрачными, не используйте мутные реагенты.

Информация для заказа

Область использования: Биохимические наборы	Производство:	Sentinel
	Метод:	кинетический
	Объем:	2х50+1х20 мл
	Кат. номер:	S/17019H
Цена (с НДС 10%):	по запросу	В корзину
Наименование: Холинэстераза . Примечание: