Изучение взаимодействия белков, несущих SH2 домены с фосфотирозином в мультиплексном формате

Procarta SH2 Domain Plex

SH2 домены - ключ к пониманию фосфотирозин-опосредованной трансдукции сигнала

SH2 домены являются медиаторами белок-белкового взаимодействия в механизме трансдукции сигнала. SH2 домены определяются по консервативному участку аминокислотной последовательности. Характеристики фолдирования этой последовательности, состоящей из 100 аминокислот, позволяют доменам специфически распознавать и связывать фосфотирозин-содержащие белки.

Существует около 120 различных SH2 доменов, которые способны связывать  110 различных белков человеческого генома. Белок-белковые взаимодействия с участием фосфотирозинов и SH2 доменов играют главную роль в трансдукции сигнала.

SH2 домены могут быть найдены в ферментах, адапторных белках, регуляторных субъединицах сигнальных белков, scaffold белках, транскрипционных факторах и онкогенных белках. Эти белки являются общими для процесса клеточного сигналлинга, поскольку они действуют в качестве адаптора между рецепторами и сигнальными молекулами, передают сигналы в клетках и регулируют киназную активность специфических белков.

Фосфорилирование белков - ключевой момент в передаче клеточного ответа, и дефект механизма SH2-домен-опосредованного сигналлинга, зачастую, прямо или косвенно оказывается причиной болезней человека.

Набор Procarta SH Domain Plex - это 30-плексный набор для определения различий в связывании SH2 доменов с фосфотирозиновыми остатками белков.

Отличительные особенности

• 96-ти луночный формат анализа с использованием технологии Luminex xTAG;
• одновременное определение до 30 профилей взаимодействия «SH2-домен - фосфотирозиновый белок»;
• возможность формирования собственного набора на заказ;
• получение результатов менее чем за 4 часа.

Связывание SH2 домена с микросферами Luminex

Panomics предлагает микросферы Luminex, конъюгированные с SH2 белками.

Обработанные и необработанные клеточные лизаты инкубируются с микросферами в отдельных лунках 96-ти луночного планшета.

Фосфотирозиновые белки связываются с SH2 микросферами

Фосфотирозиновые белки связываются со специфическими SH2 доменам, которые конъюгированы на кодированных микросферах Luminex. Нефосфорилированные тирозиновые белки не связываются с SH2 микросферами.

Детекция

Добавляются вторичные антифосфотирозиновые антитела, с последующим добавлением конъюгата стрептавидина с фикоэритрином. Полученный комплекс анализируется на системе Luminex 200.

Данные

COS клетки инкубировались без EGF и в присутствии EGF (5 минут и 30 минут). На графике приведены значения интенсивности флуоресценции для каждого SH2 доменов в 30-плексном анализе.

Наименование	Объем	Производство	Метод	Кат.Номер
Procarta Cell Lysis Buffer, 20 ml	Reagent	Panomics	Мультиплексный анализ	PC6002
Procarta SH2 Domain Plex Kit, 30-plex	30 plex, 1/4 plate	Panomics	Мультиплексный анализ	PC6001
Набор для определения белков с SH2-доменами (3P2, CSK, P85B-D1, ABL2, VAV3, P85B-D2, BTK, LCK, PLCG1-D1, GRAP, LCP2, PTPN11-D2, CRK, MATK, PTPN6-D2, CRKL, NSP1, SOCS2, DAPP1, GRB2, STAR2, FYN, P55G-D1, SYK-D2, GRB10, P85A-D1, TNS, GRB14, P85A-D2, SHC1)	30 plex, 1 plate	Panomics	Мультиплексный анализ	PC6000