Набор для определения теломеров PNA Kit/FITC методом проточной цитометрии обеспечивает удобную возможность определения последовательности теломеров в гемопоэтических клетках позвоночных. Набор содержит реагенты для 20 повторных тестов (40 тестов). Вместе с флуоресцеин-конъюгированной нуклеиновой кислотой (зондом) в растворе для гибридизации, набор содержит раствор для гибридизации без зонда для определения собственной флуоресценции клеток, промывочный раствор для пост-гибридизационной промывки и ДНК-окрашивающий раствор для идентификации клеток G0/1. Набор составлен таким образом, что постгибридизационная промывка сведена к минимуму и обработка формамидом не требуется. В смеси клеток образца (материал пользователя) и контрольных клеток (материал пользователя), ДНК образцов денатурируется при 82°C в течение 10 мин в пробирках Эппендорф в гибридизационном растворе в присутствии или отсутствии флуоресцеин-конъюгированного PNA-теломерного зонда. Затем происходит гибридизация в темноте при комнатной температуре в течение ночи. После гибридизации необходимо провести 2 промывания раствором при 40°C в течение 10 минут каждое. Затем клетки ресуспендируют в ДНК-окрашивающем растворе и оставляют в темноте при 2-8°C на 2-3 часа перед анализом методом проточной цитометрии. Специфическая флуоресценция окрашенных теломеров считывается в канале FL1, флуоресценция окрашенной ДНК - в FL3. Преимущество метода PNA Kit/FITC по сравнению с традиционным методом рестрикции фрагментов теломеров (TRF) заключается в том, что при выполнении анализа методом PNA Kit/FITC не происходит взаимодействия между собой большого количества фрагментов теломеров.
Смешивание клеток с гибридизационным раствором без зонда
Гибридизация клеток в гибридизацонном растворе, содержащем зонд PNA/FITC