Тест-системы и контрольные материалы для клинической лабораторной диагностики in vitro: Тропонин I в цельной крови тест (Troponin I WB Test (Troponin I WB-Check-1))

Troponin I WB Test (Troponin I WB-Check-1)

Тропонин I (TnI) – один из регуляторных белков сократительной мускулатуры (1). Он кодируется тремя различными генами, которые отвечают за разные формы сократительных мышечных тканей – быстрые и медленные скелетные и сердечные TnI изоформы (2). Уникальная аминокислотная последовательность делает сердечный тропонин I (cTnI) идеальным кандидатом для лабораторного тестирования острого инфаркта миокарда (ОИМ), что приводит к развитию техники тестирования с помощью моноклональных антител, не дающих перекрестных реакций со скелетно-мышечным тропонином (3). Опубликованные исследования показали полезность измерения cTnI для диагностики ОИМ (3, 4, 6). Как CK-MB, так и cTnI поднимались выше нормального уровня в течение 4-6 часов после инфаркта. Типичный уровень составлял 6,7 нг/мл для CK-MB и 3,1 нг/мл для cTnI (3). Все исследования также дают одинаковые временные рамки для пиковых значений CK-MB и cTnI: пиковое значение CK-MB наблюдалось через 13-15 часов, cTnI – через 11-15 часов. Типичный диапазон составлял 39-185 нг/мл для CK-MB и 18,5-188 нг/мл для cTnI (5). Однако уровень CK-MB возвращается к норме через 36-48 часов, в то время как уровень cTnI остается повышенным до 6-10 дней. Уровень cTnI очень низок у нормальных здоровых людей и не обнаруживается у пациентов с поврежденными скелетными мышцами. Следовательно, cTnI является специфическим маркером для диагностики ОИМ.

Предназначение и принцип метода

Качественный экспресс-тест для обнаружения сердечного тропонина I в пробах сыворотки, плазмы или цельной крови. В тесте используется особая комбинация конъюгата мышиных моноклональных антител к cTnI с красителем и иммобилизованных на мембране тестовой кассеты мышиных поликлональных антител к cTnI, что позволяет определить тропонин в тестируемых пробах с высокой степенью чувствительности. При прохождении тестируемой пробы через слой адсорбента меченый конъюгат антител с красителем связывается с тропонином пробы, образуя комплекс антиген–антитело. Этот комплекс связывается с поликлональными антителами к тропонину в тестовой зоне кассеты, образуя пурпурно-розовую полосу, если концентрация тропонина в пробе превышает 0,4 нг/мл для образцов сыворотки или плазмы и 1 нг/мл для цельной крови. Если концентрация тропонина ниже, чем 1 нг/мл, окрашенной полосы не образуется. Вне зависимости от результатов теста несвязанный конъюгат, продолжая продвигаться по слою адсорбента, достигает контрольной зоны (C), где осаждается с образованием контрольной полосы, подтверждающей качественность применяемых в тесте реагентов. Результат теста считывается визуально.

Состав

Тестовые кассеты                                            20

Одноразовые пластмассовые пипетки      20

Разбавитель во флаконе-капельнице, 5 мл 1

Инструкция                                                      1

Стабильность и хранение

1. Хранить при температуре от 4 до 30°C в герметичной фабричной упаковке.
2. Не замораживать!
3. Тест стабилен до истечения срока хранения, указанного на этикетке.

Меры предосторожности

Данный тест предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с пробами пользоваться защитной одеждой и одноразовыми перчатками.

Не принимать пищу, не пить и не курить в помещении, где выполняется работа с пробами.

При взятии и тестировании проб не прикасаться руками к слизистой оболочке глаз и носа.

Внимательно прочитать инструкцию перед проведением теста.

Не использовать тестовую кассету, если её защитная упаковка повреждена.

Не использовать тестовую кассету с истекшим сроком хранения.

Пробы цельной крови следует тестировать сразу после взятия (в течение 4 часов).

Обезвреживание отходов

Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5 – 1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа.

Подготовка реагентов

Все реагенты готовы к использованию.

Исследуемые пробы

Сыворотка, плазма (с цитратом натрия. ЭДТА или гепарином) или цельная кровь.

Взятие и подготовка проб

1. Взятие крови осуществляется с помощью стандартной лабораторной процедуры (асептическим способом, исключающим гемолиз). Все пробы следует считать потенциально инфекционными.
2. Пробы цельной крови должны тестироваться немедленно (не более 4 часов после получения).
3. Для тестирования пробы в течение 48 часов после взятия образец следует хранить в холодильнике при 2–8°C. Если же тест будет выполняться позже, пробу сыворотки или плазмы необходимо заморозить. Замороженные пробы перед тестированием следует оттаять, тщательно перемешать и довести до комнатной температуры. Повторное замораживание проб не допускается.

Процедура тестирования

1. Довести все пробы, тестовые кассеты и разбавитель до комнатной температуры.
2. Извлечь тестовую кассету из защитной упаковки, оторвав край упаковки по надрезу.
3. Пометить тестовую кассету фамилией или кодовым номером пациента.

Для образцов сыворотки или плазмы:

4. Набрать пробу в пипетку-капельницу и, удерживая ее вертикально, внести по капле 9-10 полных капель (250 мкл) сыворотки или плазмы в лунку для проб, давая впитываться предыдущей капле. Не добавлять в лунку разбавитель!

Для образцов цельной крови:

Внести в лунку для проб по капле 2 полных капли (50 мкл) образца и добавить в эту же лунку по капле 5 полных капель (200 мкл) разбавителя из флакона-капельницы, давая впитываться предыдущей капле.

6. Результаты считываются визуально через 15-20 минут после внесения пробы.

Интерпретация результатов

Негативный: Появляется только одна цветная полоса в контрольной зоне (C).

Позитивный: Кроме цветной полосы в контрольной зоне, появляется также чётко различимая полоса в тестовой зоне.

Ошибочный: Если в контрольной зоне не появилось чёткой цветной полосы, тест считается не прошедшим контроль качества. Следует повторить его (немедленно или в течение 4 часов после первого), взяв новую тестовую кассету.

Характеристики теста

а) Чувствительность:

Сыворотка / плазма

Отрицательные сыворотки человека, предварительно проанализированные с использованием анализатора STRATUS-DADE, обогащались cTnI (либо комплексным (I.T.C.), либо свободным) в различных концентрациях. Результаты показывают, что данный тест

способен специфически обнаруживать cTnI в минимальной концентрации 0,4 нг/мл в указанной процедуре тестирования (см. выше). Белок в равной степени может распознаваться как в комплексной форме (T.I.C. или I.C. - T.I.C.: тройной комплекс cTnT, cTnI и TnC; I.C.: двойной комплекс cTnI и TnC), так и в свободной форме (7).

Цельная кровь

Отрицательные образцы цельной крови человека, предварительно проанализированные с использованием анализатора STRATUS-DADE, обогащались cTnI (либо комплексным (I.T.C.), либо свободным) в различных концентрациях. Результаты показывают, что данный тест способен специфически обнаруживать cTnI в минимальной концентрации 1 нг/мл. Белок в равной степени может распознаваться как в комплексной форме (T.I.C. или I.C. - T.I.C.: тройной комплекс cTnT, cTnI и TnC; I.C.: двойной комплекс cTnI и TnC), так и в свободной форме (7).

б) Специфичность:

Отрицательная сыворотки, проанализированные с помощью анализатора STRATUS-DADE, показывали постоянные отрицательные результаты при использовании данного теста. Не наблюдалось никаких перекрестных реакций с тропонином скелетных мышц.

в) Влияния:

Следующие вещества до указанной концентрации не влияют на результаты теста:

Билирубин        10 мг/дл

Гемоглобин       250 мг/дл

Триглицериды 1000 мг/дл

Не наблюдалось никаких перекрестных реакций с тропонином скелетных мышц. Не наблюдалось никаких перекрестных реакций в негативной сыворотке с концентрацией СРБ до 96 мг/мл и РФ в концентрации до 3072 МЕ/мл.

г) Хук-эффект:

Хук-эффект не наблюдался до концентрации 5 мкг/мл как для связанной, так и для свободной формы тропонина I.

д) Воспроизводимость:

Внутрисерийная

Воспроизводимость в рамках одного анализа определялась с использованием 5 повторов образцов крови или сыворотки, как положительных, так и отрицательных по тропонину I. Совпадение положительных и отрицательных результатов составляло 100%.

Межсерийная

Воспроизводимость в рамках нескольких разных анализов определялась с использованием тех же образцов по тропонину I с использованием трех различных партий тестовых кассет. Совпадение положительных и отрицательных результатов составляло также 100%.

Ограничения метода

1. Как и для всех диагностических процедур, врачу следует принимать во внимание результат теста только в свете всей прочей диагностической информации.
2. Время, необходимое для того, чтобы уровень cTnI в крови достиг верхнего предела нормы, составляет 4-6 часов после начала заболевания, а затем он в некоторых случаях остается повышенным в течение 6-10 дней. Поэтому отрицательный результат в течение первых часов после появления симптомов инфаркта не исключает ОИМ с уверенностью. При подозрении следует повторять тест через соответствующие промежутки времени.
3. Некоторые образцы сыворотки с повышенным содержанием ревматоидного фактора или СРБ (что указывает на острое воспаление) могут давать при тестировании ложный положительный результат.
4. В случае задержки времени считывания свыше 20-25 минут также изредка могут наблюдаться ложные положительные результаты.
5. Тест разработан таким образом, чтобы исключить потенциальное влияние человеческих антител к мышиным IgG (HAMA). Однако высокий уровень HAMA может приводить к ложному положительному результату.
6. Данный тест разработан и предназначен только для визуального считывания.

Литература

1. Perry SV. The regulation of contractile activity in muscle. Biochem Soc Trans 1979; 7; 593-617.
2. Bucher EA, Maisonpierre PC, Konieczny SF, Emerson CP Jr. Expression of the troponin complex genes: transcriptional coactivation during myoblast differentiation and independent control in heart and skeletal muscles. Mol Cell Biol 1988;8 : 4134-42.
3. Bodor GS, Porter S, Landt Y, Ladenson JH. Development of monoclonal antibodies for an assay of cardiac troponin-I and preliminary results in suspected cases of myocardial infarction. Clin Chem 1992; 38: 2203-14.
4. Cummins B, Auckland ML, Cummins P. Cardiac-specific troponin-I radioimmunoassay in the diagnosis of acute myocardial infarction. Am Heart J 1987; 113 : 1333-44.
5. Bodor G. Porter S. Ladenson J. Human cardiac troponin I measurement in suspected myocardial infarction with a double monoclonal antibody sandwich ELISA. Clin. Chem. 1990, 36 (6) : 1103.
6. 6. F.S. Apple. A. WU. Myocardial infarction redefined : role of cardiac troponin testing. Clinical Chemistry. Vol. 47 no.3. 2001.
7. Bates K.J., Hall E.M. et al. Circulating Immunoreactive Cardiac Troponin Forms Determined by Gel Filtration Chromatography after Acute Myocardial Infarction. Clinical Chemistry. Vol. 56 no.6. 952-958.2010.

 

Соблюдать температуру хранения          Читать инструкцию             Не использовать повторно          Только для in vitro диагностики

 

Производитель: VEDALAB

Информация для заказа

Область использования: Экспресс-тесты VEDALAB (Франция)	Производство:	VEDALAB
	Метод:
	Объем:	упаковка (20 кассет)
	Кат. номер:	28051
Цена (с НДС 10%):	по запросу	В корзину
Наименование: Тест-системы и контрольные материалы для клинической лабораторной диагностики in vitro: Тропонин I в цельной крови тест (Troponin I WB Test (Troponin I WB-Check-1)) / Troponin I WB Test (Troponin I WB-Check-1). Примечание: Рег. Уд. ФС3 2009/05727 Экспресс-тесты для клинической диагностики VEDALAB (Франция)