Реагенты для электрофореза и блоттинга
Реагенты для электрофореза в агарозных гелях
- Агароза
- Буферы
- ДНК и РНК-маркеры
- Красители: бромистый этидий
Процедура метода:
1. Проводят электрофорез белков в полиакриламидном геле для разделения денатурированных полипептидов по молекулярной массе.
Наиболее распространённый способ разделения белков — электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS) по Лэммли.
2. Белки из геля переносят на мембрану из нитроцеллюлозы, чтобы сделать их доступными для антител и осуществить детекцию.
Перенос на мембрану осуществляется под действием электрического поля (электроблоттинг).
При этом мембрану накладывают на гель, а затем гель с мембраной помещают между слоями плотной бумаги и поролона и погружают в буфер.
3. Мембрану инкубируют с первичными антителами к белку, затем со вторичными антителами, специфичными к первичным антителам и связанными с ферментом (HRM).
4. Образовавшиеся комплексы выявляют с помощью хромогенного субстрата (например, люминола) и визуализируют с помощью имаджера.
Единообразие и общая эффективность переноса белков из геля на мембрану может быть проверена окрашиванием мембраны красителями Coomassie blue или Ponceau S.
Реагенты, необходимые для проведения Вестерн-блоттинга:
- Буферы и реагенты для их приготовления
Трис-глициновый буфер
- Готовые полиакриламидные гели и реагенты для их приготвления
Акриламид
Бисакриламид
TMED
TrisXСl
Персульфат аммония
- Красители для оценки эффективности переноса белков
Понсо S или Кумасси
- Маркеры молекулярной массы и буферы для нанесения
- Мембраны
Нитроцеллюлоза и PVDF
- Хромогенные субстраты
- Антитела
Первичные антитела (неконъюгированные или конъюгированные)
Вторичные антитела Информация для заказа
| Наименование |
Объем | Производство | Метод |
Кат.Номер |
|---|
| Агароза LM Sieve, легкоплавкая, Genetic Quality Tested, низкий ЕЕО, 250 г |
250 г | Диаэм | |
1924.0250  |
| Агарозный гель E-Gel® EX, 2%, 10 шт/уп |
| Invitrogen | |
G401002 |
| Акриламид, 3х кристал., для молекулярной биологии (без ДНКз, РНКз, протеаз, фосфата), 500 г, Индия |
| --- | |
910550.500 |
| Бумага для блоттинга, для кассет Mini Trans-Blot, 7,5x10 см |
50 шт/упак. | Bio-Rad | |
1703932 |
| Бумага фильтровальная для блоттинга, 11,3х7,7 см |
60 шт/упак. | Bio-Rad | |
1620161 |
| Буфер ТBЕ, pH 8,3, 10Х, 250 мл |
| Диаэм | |
3774.0250 |
| Буфер Трис (Ultra Pure Grade), 1 кг (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
15504020 |
| Буфер Трис-HCl 1 M pH 7.0, Jena Bioscience |
1 л. | --- | |
BU-124L-70 |
| Восстанавливающий загрузочный буфер для анализа белков 5Х, 5 мл/уп Pierce™ Lane Marker Reducing Sample Buffer |
| --- | |
39000 |
| Додецилсульфат натрия, 500 гр. (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
15525017 |
| Казеин 95% для биохимии, 95% |
100 г | Диаэм | |
044885.100 gm |
| Калибровочный набор LMW для электрофореза |
| GE, General Electric | |
17-0446-01 |
| Кумасси R 250, 5 г |
| --- | |
О121-П |
| Маркер молекулярных масс белков "PageRuler™ Unstained Broad Range Protein Ladder" с добавлением красителей, 11 реферов (5 - 250 кДА), 2 х 250 мкл. |
| --- | |
26630 |
| Маркер молекулярных масс для белкового электрофореза PageRuler™ Plus, 10 to 250 kDa (не для использования в медицинских целях) |
| Thermo Fisher Scientific | |
26619 |
| Мембрана для эл.фореза белков и блоттинга, нитроцеллюлоза, 9х12см, 0,45мкм |
10 листов | Bio-Rad | |
1620117 |
| Мембраны для блоттинга Zeta-Probe Membrane, 20 см x 3.3 м |
| Bio-Rad | |
1620165 |
| Набор реагентов для окрашивания белков коллоидным кумасси G-250 в полиакриламидных гелях и на ПВДФ (поливинилиденфторид) -мембранах "PageBlue™ Prot |
| --- | |
24620 |
| Натриевая соль бромфенолового синего для электрофореза, 5г |
| NeoFroxx GmbH | |
2147GR005 |
| Персульфат аммония, 4 х 25 гр. (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
17874 |
| Пластиковая подложка для геля 15х20 см Sub-Cell 6TUV |
| Bio-Rad | |
1704418 |
| Раствор акриламида SureCast™ Acrylamide Solution (40%), 450 мл (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
HC2040 |
| Система E-Gel Power Snap для ДНК электрофореза с камерой |
| Thermo Fisher Scientific | |
G8300 |
| ТЕМЕД (Тетраметилэтилендиамин), 25 мл (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
17919 |
| Тетраметилэтилендиамин (TEMED), ≥ 99%, CAS 110-18-9, 100 мл |
| Servicebio | |
GC203001-100ML |
| Трис (гидроксиметил) аминометан, 500 г |
| --- | |
Х270.500 |
| Форезный буфер Трис-глицин-SDS 10X, 1 литр (не для использования в медицинских целях) |
| --- | |
28362 |
| ЭДТА Na2 х 2 водн., 100 г. |
| NeoFroxx GmbH | |
1108.100 |
|
