Выделение кампилобактеров из воды

SO 17995:2005. Качество воды – обнаружение и подсчет термотолерантных кампилобактеров

День 1. Посев в обогатительные среды

В качестве селективных обогатительных сред параллельно используют бульон Preston и бульон Bolton. Перед посевом среды должны быть прогреты до температуры 20-30 ⁰С

Профильтровать через мембранные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм 2 объема воды по 100 мл, 2х10 мл и 2х1 мл. Не допускать длительной аэрации.

Незамедлительно перенести фильтры во флаконы (100 мл) с бульонами Preston и Bolton. Если флаконы снабжены завинчивающимися крышками – плотно не закрывать (только накрыть).

Инкубировать в микроаэробной атмосфере при 37 ⁰С 44-48 час.

День 3. Высев на селективную среду

Из каждого флакона бактериологической петлей объемом 10 мкл делают высев на mCCDA для получения изолированных колоний.

Инкубировать в микроаэробной атмосфере при 42 ⁰С 44-48 час, с просмотром через 24 часа.

День 5 (4). Отбор колоний. Подтверждающие и идентификационные тесты

Отобрать чашки, на которых выросли типичные (для кампилобактеров) или подозрительные колонии. Приготовить препараты для микроскопии с использованием фазового контраста (определение подвижности) и окраски по Граму. Колонии, образованные грамнегативными клетками с характерной для кампилобактеров морфологией и штопорообразной подвижностью, отсеять на сектора чашек с агаром Columbiaс 5% крови барана.

Инкубировать в микроаэрофильной атмосфере при 42 ⁰С 44-48 час.

День 7. Идентификационные тесты

Для идентификации выделенных культур поставить тест на оксидазу, каталазу, гидролиз гиппурата и индоксил-ацетата

Наименование	Объем	Производство	Метод	Кат.Номер
Bolton Broth Selective Supplement acc. to ISO 10272-1 (+4 °C)	10 шт	---		1.00079.0010
IGS60 инкубатор (серии HERATHERM General Protocol) температурный диапазон от Тос +5°C to 75°C; естесственная конвекция, 2 полки. РУ МЗ – в наличии) 75л	75 л	Thermo Fisher Scientific		51028130
Добавка для кампилобактерий (Preston Campylobacter Supplement)	10 фл (каждый на 500 мл среды)	Conda	Микробиология	6019
Основа агара для кампилобактерий (Campylobacter Agar Base (Preston))	500 гр	Conda		1131
Петля бактериологическая (ПС, 10 мкл, с заостренным концом, стерильная)	1 шт	ГЕМ		6010/SG
Петля микробиологическая с алюминиевым держателем № 3	2 шт./уп.	---		12007327
Фильтрующая насадка на шприц SYRINGE FILTER,PES,0.45UM,25MM,STERILE	50 шт/упак	Nalgene		725-2545