Принцип процедуры тестирования Double Antibody Sandwich ELISA (DAS ELISA)

• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Nano Diagnostics
• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Agdia

I. Принцип процедуры тестирования Double Antibody Sandwich ELISA

Наличие патогена доказывается при помощи твердофазного иммуноферментного анализа по методике "сэндвич“ с использованием двух поликлональных антител.
Ha первой стадии инкубации происходит иммобилизация специфическиx антител иммуноглобулинов группы Г (IgG) на внутренней поверхности лунок 96-луночного микропланшета.

На второй стадии инкубации добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. Антиген реагирует с иммобилизованным антителом и образуется комплекс антиген-антитело. Во время третьей стадии инкубации в лунки добавляют специфические антителa, меченые ферментом щелочная фосфатаза (Alkalische Phosphatase AP) или конъюгат. В результате образуется специфический иммунокомплекс антитело-антиген-антитело-АР-конъюгат.

Далее следует ферментативная реакция щелочной фосфатазы AP с бесцветным субстратом 4-нитрофенилфосфат, при которой образуется свободный 4-нитрофенол, придающий раствору жёлтый цвет. Интенсивность окраски при этом пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству исследуемого антигена. Результат оценивается спектрофотометрически при 405 нм после 1-го часа инкубации.

II. Проведение теста

*Промывка: После каждого инкубационного шага необходимо удалить реагент из лунок и промыть необходимое
количество раз (указано в таблице). При использовании автоматичекого промывочного устройства уменьшить
количество промывок до 4-х раз.

III Формулировки

Оценка: Мы рекомендуем иcпользовать при каждом тесте лиофилизованные препараты, дающие
положительные и отрицательные контрольные реакции, что даёт контроль качествa проведённого анализа. Для
исключения неспецифических реакций необходимо также тестировать свежий сок здоровых растений одного и
того же вида.