Реагенты для SSP-типирования
Реагенты Micro SSP™ - это линия тестов для HLA-типирования с использованием специфических праймеров (SSP), включающая тесты низкого разрешения (Generic), тесты высокого разрешения (High Resolution), аллель-специфичные тесты (Allele Specific), тесты для определения одной аллели (Singles) и тесты для прояснения неоднозначных результатов серологического типирования (Seramates).
Преимущества технологии Micro SSP® от компании One Lambda
- получение результата типирования менее, чем за 2 часа;
- генотипирование с высоким и низким разрешением;
- широкий спектр определяемых аллелей (полный список см. ниже);
- праймеры уже внесены в лунки планшета;
- все реагенты набора готовы к использованию;
- внутренний контроль в каждой лунке планшета;
- минимальный расход гелей.
Содержание наборов Micro SSP®
Наборы Micro SSP® включают специфичные праймеры для амплификации ДНК-локусов HLA-аллелей и человеческого гена β-глобина (внутренний контроль) методом ПЦР. Оптимизированные наборы праймеров внесены (в сухом виде) в ячейки 96-луночного микропланшета и готовы для добавления образцов ДНК, Taq-полимеразы с dNTP и буферного раствора (Micro SSP D-mix). Наборы выпускаются в 96-луночном (рекомендуется использовать любой 96-луночный амплификатор) и 384-луночном форматах (требуется амплификатор с термоблоком 384-well).
Чем Micro SSP® отличается от стандартной технологии SSP?
Micro SSP® от One Lambda - это полностью оптимизированная технология генотипирования на основе ПЦР: помимо реагентной базы (5 типов тестов) разработаны специальные системы - для переноса 96 образцов в гель одним движением и электрофореза с коротким временем пробега образцов.
 
Специально разработанная система для электрофореза с камерой небольшого размера позволяет существенно экономить реактивы: для анализа 96 образцов Вам необходимо 30 мл агарозного геля и 10 мл ТВЕ-буфера (в 200 раз меньше, чем при использовании стандартной камеры на 96 образцов). Однозначный результат (да/нет) уже через 3 минуты!
По сравнению с использованием обычной камеры для электрофореза Вы можете сэкономить до 180 000 рублей в год (при проведении 1 электрофореза в день с использованием агарозы Lonza SeaKem®).
Одно из главных преимуществ системы для электрофореза Micro SSP® - простая интерпретация результатов анализа. Вам не нужно сопоставлять продукты амплификации и полосы пробега - однозначный результат типирования (наличие/отсутствие продукта ПЦР) за 3 минуты.
Уникальная разработка компании One Lambda - устройство для быстрого переноса 96 образцов из планшета в агарозный гель. Дозатор на 96 образцов позволяет наносить все пробы с планшета в гель одним движением!
- высокая точность нанесения - ошибки при нанесении образцов в гель исключены благодаря специальному трафарету для выравнивания;
- надежность конструкции - иглы выполнены из нержавеющей стали и легко моются;
- возможность калибровки дозатора.
Использование наборов Micro SSP® в 384-луночном формате
Для увеличения производительности генотипирования Вам доступны наборы Micro SSP® в 384-луночном формате. Специально для работы с 384-луночными микропланшетами компания One Lambda разработала устройство, облегчающее загрузку образцов в планшет - 384 LOAD TEMPLATE, а также набор трафаретов для переноса продуктов ПЦР из 384-луночного планшета в гель - Well Identification Templates. Данные устройства значительно упрощают работу оператора и существенно сокращают время получения результатов генотипирования методом Micro SSP®.
Принцип метода SSP
Метод SSP основан на более эффективном взаимодействии праймеров с ДНК (с последующей амплификацией) при их полной комплементарности, чем при частичном несовпадении. Праймеры подобраны так, что эффективно связываются только с одной аллелью (или с группой аллелей). В процессе ПЦР амплифицируется только полностью комплементарная праймерам ДНК-мишень (позитивный результат). При частичном несовпадении праймеров и ДНК-мишени результаты типирования негативные (амплификации продукта не происходит).
После ПЦР амплифицированные фрагменты ДНК разделяют в агарозном геле. Интерпретация результатов HLA-типирования сводится к однозначному да/нет - присутствие или отсутствие продуктов ПЦР. Поскольку на ПЦР могут негативно влиять различные факторы (ошибки при внесении реагентов, низкое содержание ДНК-мишени в начальной пробе, присутствие ингибиторов и другие), в каждую пробу включен внутренний контроль. Праймеры внутреннего контроля комплементарны консервативному участку человеческого гена β-глобина, присутствующего во всех образцах ДНК человека.
Амплифицированные фрагменты HLA-локусов меньше, чем внутренний контроль, но больше, чем свободные праймеры. Таким образом, позитивные результаты амплификации HLA аллелей или групп аллелей визуализируются в агарозном геле между ДНК внутреннего контроля и свободными праймерами.
Процедура метода SSP
 |
 |
 |
 |
 |
Добавить Taq-полимеразу и
ДНК в пробирку с D-mix |
Перенести смесь из
пробирок в планшет |
Провести ПЦР |
Провести электрофорез |
Анализ результатов |
| 
