ПЦР (Полимеразная цепная реакция)
Метод ПЦР (полимеразной цепной реакции, PCR, polymerase chain reaction) является наиболее популярным методом анализа ДНК на сегодняшний день.
Наша компания предлагает полный перечень оборудования для ПЦР. Мы обладаем значительным опытом оснащения ПЦР-лабораторий "под ключ": мы поможем не только подбрать оборудование и реагенты под ваши конкретные задачи, но и проведем бесплатное обучение методу ПЦР, поможем с подготовкой помещений для будущей лаборатории, предоставим методические указания и нормативные акты.
Метод ПЦР позволяет специфично увеличивать (амплифицировать) количество ДНК исследуемого образца в миллиарды раз. Идея ПЦР основана на том, что конкретный ген можно размножить в пробирке, многократно увеличивая количество его копий. Механизм ПЦР заключается в синтезе in vitro коротких нуклеотидных последовательностей для последующего анализа. Для проведения ПЦР нужны пара олигонуклеотидов (праймеров), комплементарных исследуемому фрагменту, нуклеотидтрифосфаты (dNTP) и фермент ДНК-полимераза. В определенных условиях праймеры способны распознавать комплементарные последовательности в денатурированной ДНК, связываться с ними и служить затравкой для ферментативного синтеза копий участка изучаемого гена. Каждый цикл синтеза удваивает число копий фрагмента-мишени, т.е. количество продукта (амплификата) в процессе ПЦР нарастает в геометрической прогрессии. Для детекции методом гель-электрофореза продукта амплификации необходмо 1011 - 1012 молекул. 25-35 циклов реакции дают достаточно амплификата для дальнейшего изучения даже из единичного фрагмента ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 миллиардов идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в исследуемом образце в минимальных количествах (например, однокопийный ген).
Метод ПЦР теоретически позволяет обнаружить даже 1 копию ДНК в образце. Еще одно преимущество ПЦР заключается в том, что для нее характерна не только абсолютная чувствительность, но и абсолютная специфичность. ПЦР не дает ложноположительных результатов, при условии, что метод выполняется правильно. Не менее важным достоинством ПЦР является простота исполнения.
ПЦР-метод не является заменой традиционных морфологических, биохимических или иммунологических методик, но их существенным и необходимым дополнением. Опыт организации и работы ПЦР-лабораторий в ряде экспертных и санитарно-эпидемиологических учреждений показывает, что, несмотря на первоначальные затраты и накладные расходы, медико-экономический эффект настолько значителен, что позволяет проводить научно-методическую и просветительскую работу, значительно повысив уровень санитарно-эпидемиологической безопасности на территории России.
В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов ПЦР, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. ПЦР в реальном времени не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории.
Дополнительная информация о методе ПЦР
|