Выделение стволовых клеток из периферической крови путем афереза.

Аферез - это экстракорпоральное разделения компонентов крови или костного мозга. Выделяют несколько разновидностей афереза: плазмаферез (обмен плазмы) - выделение плазмы крови и возвращение эритроцитов; тромбоферез - выделение тромбоцитов с небольшим количеством плазмы и возращение крови с эритроцитами пациенту; цитаферез (лейкоферез) - это выделение клеточных компонент крови, с целью их модификации и возвращения пациенту. Принцип разделения крови основан на различной плотности клеток и скорости их осаждения за счет различного размера. Разделение происходит при непрерывном центрифугирование путем отбора требуемых слоев расслоившейся клеточной массы и плазмы. Оставшиеся компоненты возвращаются пациенту.

В настоящее время аферезные системы получили широкое распространение для аутотрансплантации стволовых клеток периферической крови (СКПК). Использование СКПК в отличие от стволовых клеток костного мозга (СККМ) избавляет доноров от травматических процедур получения костного мозга (КМ) и позволяет получить более быстрое восстановление кроветворения и иммунитета по сравнению с трансплантацией КМ. Поскольку достаточное для трансплантации количество СКПК может быть получено только из объема сопоставимого с объемом всей периферической крови человека, то аферез является единственным способом получения СКПК. Аферез СКПК на сегодняшний день достаточно безопасная процедура, даже у очень маленьких детей.

Для эффективной аутотрансплантации кроветворных клеток необходимо более 2Х10⁶ CD34+ клеток на кг веса. Перед выделением СКПК необходима их мобилизация из КМ, что достигается пятидневной стимуляцией гранулоцит-колониеобразующим фактором (G-CSF) или аналогами. Данная процедура позволяет собрать ядерные клетки периферической крови с содержанием стволовых (СD34+) до 0,1 - 1 %. Объем обрабатываемой крови сильно зависит от пациента и процедуры стимуляции/сепарации. Обычно используют методику большого объема лейкофереза с обработкой от 4 до 6 объемов циркулирующей крови, что соответствует 10 - 15 л и 2 - 6 часам. После афереза клетки могут быть разделены на более чистые фракции методами магнитной сепарации или проточной флуоресцентной сортировкой.

Аферезные системы cobeSpectra фирмы Gambro BCT специализированы для выделения определенных фракций клеток и различаются версиями программного обеспечения и сепарационными камерами. Обогащение СК из периферической крови (СКПК) производится аппаратами с версиями 6.1 и выше. Для этого используется двухкамерная конфигурация и специальная программа AutoPBCS. Разделение крови проходит в два этапа в полностью автоматическом режиме: первая - отделение эритроцитов и лейкоцитов от плазмы с тромбоцитами и накопление мононуклеаров в определенной зоне камеры, и вторая - продавливание мононуклеаров плазмой в сборный контейнер (плазма отсекается от попадания в контейнер).